快速、温和、灵活的超高分辨率显微镜3D成像系统 您在进行生命科学研究时通常需要测量、量化并理解样品的全部细节和亚细胞结构。科学家可能需要研究组织、细菌、亚细胞结构、神经元、活细胞或固定细胞等。
在线咨询图像重建算法SIM²可以将SIM技术提升到一个新的水平,让您能够将传统的SIM分辨率翻倍。Lattice SIM²具有出色的非焦平面光抑制能力,即使是高度散射的样品,也能在宽场显微镜下提供清晰的光学切面。针对活体和固定样品,SIM²都可以对采集到的数据进行可靠的数据重构,同时将伪迹最小化。
在实现传统SIM分辨率翻倍的同时,SIM²让您能以高达255 fps的速度对活体和固定样品进行低光毒性成像。SIM²与Burst、Leap模式相结合,可以更胜以往的速度进行超高分辨率采集。使用SIM Apotome模式,甚至可以实现几乎无损的图像采集,这意味着每次重建图像只需要一个原始图像!或者利用Elyra 7 Duolink同时对两个不同的染色结构进行成像,并使用多通道荧光进行超高分辨率成像。
Elyra 7几乎可以处理所有类型的样品,包括对光毒性敏感的培养细胞、具有较强散射性的线虫,以及厚度不超过100 μm的植物或组织切片。Elyra 7集数种显微技术于一身,包括:LatticeSIM²、SIM² Apotome、宽场DIC、SMLM和TIRF。您可以任意使用这些技术(甚至全部用上)来采集图像,并将同一样品的图像关联起来,从而深化对于样品的认知。您甚至可以利用关联成像流程把Elyra 7与其它各种成像系统相结合,如配备Airyscan的LSM共聚焦显微镜或扫描电子显微镜。
Lattice SIM使用点阵模式的晶格状栅格(而非传统SIM中的网格线)来照射样品区域。这样,成像速度得到了大幅提高。此外,晶格模式还提供更高的对比度,从而更可靠地重建图像。由于晶格模式照明的采样效率是传统SIM的2倍,因此样品照明所需的激光剂量更少。这种晶格照明使得SIM成为了理想的活细胞成像技术。晶格照明的光子效率得到了大幅提升,这让您能够在提高成像速度的同时,也能获得更高的对比度和更低的光漂白。
SIM²是一种突破性的新型图像重建算法,可提高结构照明显微镜数据的分辨率和光学切面质量。SIM²兼容Elyra 7的所有SIM成像模式,并完全集成在ZEN软件中。
与传统重建算法不同,SIM²是一种双步图像重建算法。第一步,进行衍射级次合并,实现去噪和频率抑制滤波。所有这些数字图像操作所产生的效果都转化为数字SIM点扩散函数(PSF)。后续的迭代反卷积使用的正是PSF。与使用实验性PSF对基于硬件的显微数据反卷积的优势类似,SIM²算法在分辨率、光学切面和稳定性方面优于传统的单步图像重建法。
Lattice SIM²可以让您对传统染色样品进行精细至60 nm分辨率的多色成像。联会复合体由于体积小,以前只能使用复杂的方法(如三倍扩大样品的超高分辨率成像)才能对其进行三色成像。无需对样品进行特殊处理或染色,Lattice SIM²便可以分辨出远低于100 nm距离的SYCP3(侧生组分)和SYCP1-C(横向细丝的C-末端)两条线状。更重要的是,三色图像提供了关于SYCP3蛋白和SYCP1蛋白之间距离的结构信息。即使在SYCP1蛋白中,N-和C-末端两个标记之间不足50nm,也可以被清楚的分离。
SIM Apotome
当使用宽场显微镜进行活细胞成像时,常常会受到非焦平面模糊信号及背景信号的干扰, 从而降低图像的对比度和分辨率。Elyra 7提供SIM Apotome模式,利用结构光照明,提供高对比度及高分辨率(包括横向和轴向)的快速光学切面图像。
SIM² Apotome
SIM Apotome采集模式与SIM²重建算法相结合,让您可以对高对比度、高分辨率的快速活细胞成像进行进一步低光毒性调整。在以不同放大倍数获取大面积或大体积样品图像的同时,也可以使用更快的光学切面速度来提高工作效率。
在单分子荧光定位显微技术 (SMLM) 中,可随机激活荧光分子,仅让众多分子中的一个处于激活状态。这使得您能够获得高于点扩散函数(PSF)衍射极限的定位精度。一旦被记录,分子将会变为暗态,然后重复激活与关闭的过程,直至所有分子被捕获。在一幅新图像中将绘制出定位信息,供您创建超高分辨率图像。您可以使用Elyra 7的SMLM技术(如PALM、dSTORM和PAINT),实现20 – 30 nm的横向分辨率。ZEN软件将对您的数据进行无缝图像重建。
此外,Elyra 7还提供基于PRILM技术的3D SMLM模式。为了编码Z轴,PSF得到了重塑,于是在只采集一个平面的同时,您可以获得1.4 µm深度的体积信息(轴向分辨率为50 – 80 nm)。因此,您可以获得具有一致分子级别分辨率的完整细胞3D数据。
活体样品的研究常常聚焦于不同蛋白质或细胞器的相互作用。对相关结构同步成像是正确理解这些高速动态过程的关键。为您的Elyra 7配备Duolink适配器,以操作两台sCMOS相机,并充分利用宽场技术的所有优势:
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